薬剤師国家試験 第107回 問114

薬物Aに感受性のある培養細胞を用いて、その細胞内の代謝調節タンパク質B について調べることにした。 図 1 薬物A 1 時間培養 培地を除去 細胞を回収し破砕する 低速遠心 上清 沈殿(核画分) 高速遠心 上清を除去 沈殿(膜画分) 操作の流れを図 1 に示す。培地に薬物Aを添加して細胞を 1 時間培養した後、培 地を除去してから細胞を回収した。細胞を破砕し、低速度の遠心操作で核画分を分 離回収した。さらに高速度の遠心操作で、核を除いた細胞の膜画分を分離回収し た。また、対照として、培地に薬物Aを添加しなかった細胞についても同様の操作 を行った。 ドデシル硫酸ナトリウムを用いたポリアクリルアミド電気泳動(SDS–PAGE) にて、核画分及び膜画分中のタンパク質を分離し、タンパク質Bに対するポリク ローナル抗体を用いてウエスタンブロットを行った。SDS–PAGE は、還元剤(2– メルカプトエタノール)を添加した条件と添加しない条件の 2 通りの方法で行った ところ、図 2 に示す結果を得た。 19 図 2 還元剤非添加 還元剤添加 分子量 分子量 (kDa) (kDa) 100 100 70 70 50 50 30 30 20 20 レーン 1 2 3 4 レーン 1 2 3 4 レーン 1 薬物A非添加 核画分 2 薬物A非添加 膜画分 3 薬物A添加 核画分 4 薬物A添加 膜画分 以上の実験とその結果から推測される記述のうち、正しいのはどれか。2つ選 べ。