生物
薬剤師国家試験 第101回 問117
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ヒト細胞における既知遺伝子の発現を PCR(polymerase chain reaction)法 により検出するために以下の実験を行った。実験方法と考察に関する記述のうち、 正しいのはどれか。2つ選べ。 【実験】 ヒト細胞から抽出した RNAを用いて、逆転写反応により相補的 DNA (cDNA)を合成した。この cDNAを鋳型として、既知遺伝子の部分的塩基配列を 増幅する特異的なセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを用いて、定法に 従い 24、26、29及び 33サイクルでの PCR法を行った。得られた増幅 DNA断片 を DNA検出試薬を含むアガロースゲル電気泳動法にて分離し、図のような結果 (レーン1〜4)を得た。なお、レーン番号の順序は、サイクル数の順序とは一致 しない。また、各サイクルでの DNA増幅率はほぼ 100%であり、上記サイクル数 の間では、DNAは指数関数的に増幅された。 陰極(−) 電気泳動 増幅DNA断片 方向 陽極(+)
正解と解説
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正解 3, 5
各サイクルでの増幅率はほぼ100%で指数関数的に2倍ずつ増加するため、レーン間のバンド強度の差からサイクル数の差を推定でき、レーン2とレーン3では4サイクル分の差があることから理論上2の4乗すなわち約16倍のDNA量の差が生じると考察され、バンド強度のパターンからレーン1は26サイクルの産物と判断できる。