薬剤師国家試験 第102回 問117

マウスのある細胞において、タンパク質(ア)及び(イ)の産生は転写因子X により調節されている。両タンパク質の産生に対するその転写因子の機能を明らか にするため、以下の siRNA(低分子干渉 RNA)導入実験を行った。実験方法、 原理と考察に関する記述のうち、適切なのはどれか。2つ選べ。 【実験】 転写因子Xに対する siRNAを導入しない細胞A及び導入した細胞Bを 24 時間培養した。その後、細胞を破壊し、全タンパク質を回収して、それぞれ試料A 及びBとした。同一タンパク質量の試料A及びBを用いて SDS-ポリアクリルアミ ドゲル電気泳動を行い、分離されたゲル中のタンパク質をニトロセルロース膜に転 写した。次に、そのニトロセルロース膜においてタンパク質(ア)及び(イ)に対 する特異的抗体を用いた抗原抗体反応を行った。その結果、図のようにそれぞれの タンパク質に特異的なバンド(黒色)を検出した。なお、実験に用いた siRNAは 特異的に転写因子Xの mRNAをノックダウンすること、そのノックダウン効果は 培養 24時間の時点で最大となること、さらにタンパク質(ア)及び(イ)のニト ロセルロース膜への転写効率に差がないことを確認している。 タンパク質(ア) タンパク質(イ) 電気泳動 の方向 M 試料A 試料B M 試料A 試料B M:あらかじめ色素にて標識した分子量の異なる既知タンパク質を 電気泳動時の分子マーカーとして泳動した。