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Certia
生物

薬剤師国家試験 第104回 問112

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マウスの肝臓から酵素Xの精製を試みた。以下に実験手順の概要(1~4)を 示す。 1 ゲル濾過クロマトグラフィーにより肝臓抽出液Aを分画した。 2 各画分の酵素Xの活性を測定し、その活性が高い画分を集めたものをBとし た。 3 Bを陰イオン交換クロマトグラフィーにより分画した。 4 各画分の酵素Xの活性を測定し、その活性が高い画分を集めたものをCとし た。 上記A、B及びCの液量、タンパク質濃度、全タンパク質量と酵素活性(全活性 及び比活性)を以下の表に示した。比活性とは、試料中のタンパク質の単位重量当 たりの酵素活性のことである。なお、酵素活性における 1 U(ユニット)は、 1 分 間当たり、 1 nmol の生成物を生成する酵素の量を表す。 表 実験結果のまとめ 液量 タンパク質濃度 全タンパク質量 全活性 比活性 試料 (mL) (mg/mL) (mg) (U) (U/mg) A 10 20.0 200 10,000 50 B 20 2.00 40.0 8,000 ア C 5.0 1.00 5.00 7,000 イ 実験方法及び結果に関する記述のうち、正しいのはどれか。2つ選べ。

正解と解説

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正解 3, 4

陰イオン交換クロマトグラフィーでは、正の電荷をもった樹脂に酵素Xが保持されたと考えられる。 / Bの比活性アはAの比活性よりも高い。

表よりBの比活性アは全活性8,000Uをタンパク質量40.0mgで除した200U/mgとなり、Aの比活性50U/mgより高いため記述4は正しい。陰イオン交換クロマトグラフィーは正の電荷を帯びた樹脂に負電荷を持つタンパク質が保持される原理であるため記述3も正しい一方、Aからの回収率は8,000/10,000=80%であり20%ではなく、ゲル濾過では分子量の大きいタンパク質ほど排除体積に近く早く溶出されるため、これらの記述は誤りとなる。

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